Clostridi solfito-riduttori

Sono bacilli sporigeni Gram-positivi, anaerobi stretti, in grado di ridurre il solfito in solfuro. Il genere Clostridium comprende circa 80 specie diffuse nel suolo, nelle acque, nella vegetazione. Più resistenti dei coliformi totali e fecali, il loro isolamento nell'acqua potabile indica una contaminazione regressa. Alcune specie colonizzano le vie digerenti dell'uomo e degli animali, la cute e l'orofaringe. Producono enzimi, emolisine ed esotossine quali la tossina tetanica ( C. tetani) , la tossina botulinica ( C. Botulinum) e la gangrena gassosa ( C. perfringens). I clostridi della gangrna gassosa sono diffusi nel suolo e nell'intestino umano. Il loro riconoscimento non sempre viene effettuato . La tecnica utilizzata è la ricerca delle spore col metodo delle membrane filtranti in atmosfera anaerobica all'interno di una giara. La giara è un contenitore di plastica trasparente,ermetico, in cui dopo l'introduzione delle piastre seminate è possibile creare condizioni di anaerobiosi, confermate da un indicatore di ossido-riduzione. Determinazione dei clostridi solfito-riduttori Il campione da esaminare va pretrattato a 80°C per 10' e si raffredda velocemente per provocare lo shock termico ed inattivare le forme vegetative. La metodica si articola nei seguenti punti: si filtra su una membrana di nitrato di cellulosa ( 0,45 m di porosità) 100 ml di campione; si pone la membrana su terreno SPS Agar utilizzando gli appositi dischi assorbenti predisposti sul fondo delle piastre di Petri ; si ricopre il filtro con 10 ml di terreno SPS Agar disciolto e mantenuto a 45°C (Quest'ultima operazione non è necessaria se si colloca sul terreno il filtro capovolto); le piastre si pongono ad incubare in anaerobiosi in giara a 37°C per 24 ore; si contano le colonie nere con alone nero di almeno 3cm di diametro; il valore va riferito a 100 ml di campione. Il terreno selettivo Sulphite Polimixin Sulphadiazine Agar ( SPS Agar) è specifico per l'isolamento ed il conteggio di Clostridium perfringens nell'acqua e negli alimenti. Contiene tra l'altro solfito di sodio, citrato ferrico, polimixina e sulfodiazina. Gran parte dei clostridi riducono il solfito a solfuro il quale, reagendo con il citrato ferrico, forma un precipitato di solfuro di ferro che causa l'annerimento delle colonie. Non si eseguono prove di conferma.